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ELISA試劑盒常見問題解析
1. 標準曲線線性不佳?
可能原因?：
標準品溶解不充分或稀釋錯誤(建議使用新鮮配置的母液)。
孵育時間/溫度不穩(wěn)定(需嚴格控制在37℃±1℃)。
洗板不jing(建議使用洗板機，確保每孔注滿洗滌液)。
解決方案?：
標準品分裝后-20℃保存，避免反復凍融。
使用前充分震蕩混勻，梯度稀釋時更換槍頭。
2. 顯色異常(顏色過淺或過深)?
可能原因?：
底物溶液失效(TMB避光保存，開封后1個月內用完)。
終止液添加時間不一致(建議顯色后5分鐘內終止)。
樣本濃度過高(需預實驗確定稀釋倍數(shù))。
解決方案?：
檢查底物是否出現(xiàn)藍色沉淀(變質標志)。
使用酶標儀讀取OD值，避免肉眼判斷誤差。
3. 重復性差(板內/板間變異大)?
可能原因?：
加樣量不準(建議使用校準后的移液器，避免氣泡)。
孔間污染(加樣時槍頭勿觸碰孔壁)。
孵育環(huán)境不均(使用恒溫搖床或水浴)。
解決方案?：
設置復孔(至少3孔/樣本)，CV值應<15%。
4. 高背景值?
可能原因?：
封閉不充分(建議使用5%脫脂奶粉或BSA封閉)。
一抗/二抗?jié)舛冗^高(需優(yōu)化抗體稀釋比例)。
洗滌液殘留(洗板后拍干，避免交叉污染)。
解決方案?：
增加封閉時間(37℃ 1小時或4℃過夜)。
5. 樣本OD值超出標準曲線范圍?
可能原因?：
樣本基質干擾(如高脂、溶血樣本需預處理)。
樣本稀釋倍數(shù)不足(建議預實驗確定線性范圍)。
解決方案?：
使用樣本稀釋液(含1% BSA或0.1%吐溫-20)。
6. 酶標儀讀數(shù)異常?
可能原因?：
濾光片選擇錯誤(TMB檢測需450nm，OD校正570nm)。
孔底氣泡或污染(讀數(shù)前輕震板)。
解決方案?：
定期校準酶標儀，使用空白孔調零。
操作注意事項?
試劑平衡?：所有試劑使用前需室溫平衡30分鐘。
時間控制?：顯色反應時間嚴格按說明書(通常10-15分鐘)。
數(shù)據(jù)記錄?：及時記錄OD值，避免終止液揮發(fā)后讀數(shù)。
若問題持續(xù)，建議聯(lián)系供應商提供技術復核(如抗體效期驗證或樣本檢測)。
注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
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