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如何正確使用ELISA板進行實驗?
以下是ELISA板正確使用的實驗指南，本生結(jié)合關(guān)鍵操作要點和常見問題解決方案：
一、實驗前準備
板選擇與處理?
優(yōu)先選用聚苯乙烯材質(zhì)96孔板(吸附性能均衡)，新板需用去離子水沖洗去除雜質(zhì)?
包前用碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)平衡，避免溫差導(dǎo)致板變形
試劑配制?
標準品需現(xiàn)配現(xiàn)用，凍存樣本避免反復(fù)凍融(建議分裝保存)
封閉液推薦5% BSA-PBST(含0.05%吐溫20)，37℃預(yù)溫30分鐘
二、核心操作步驟
包被與封閉?
抗原/抗體包被濃度1-10 μg/mL，100μL/孔，4℃過夜或37℃ 2小時?
封閉液需覆蓋孔底，37℃孵育1小時，拍干時避免殘留液體
加樣與孵育?
樣本與標準品同步加樣，避免邊緣效應(yīng)(邊緣孔可加PBS緩沖)
37℃孵育時用保鮮膜封板，每10分鐘輕震混勻一次
三、關(guān)鍵質(zhì)控點
洗滌規(guī)范?
手工洗板需拍干后立即加洗滌液，機器洗板需檢查針頭通暢性
洗滌次數(shù)3-5次，最后一次拍干后30秒內(nèi)加下一試劑
顯色控制?
TMB避光孵育時間需預(yù)實驗確定(通常10-20分鐘)
終止液加入后15分鐘內(nèi)讀數(shù)，雙波長檢測(450/630nm)
四、常見問題處理
高背景?：增加洗滌次數(shù)至5次，或更換封閉液為5%脫脂奶粉?
板間差異?：同一實驗使用同一批次板，加樣時使用多通道移液器
注：具體參數(shù)需根據(jù)試劑盒說明書調(diào)整，建議每板設(shè)置陰陽性對照及標準曲線(R2>0.99)。
注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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