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ELISA實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的誤差來(lái)源有哪些?
ELISA實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的誤差來(lái)源可分為以下幾類(lèi)，結(jié)合最新研究與實(shí)踐總結(jié)如下：
一、樣本相關(guān)因素
內(nèi)源性干擾物質(zhì)?：類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)、補(bǔ)體、嗜異性抗體等可與抗體非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽(yáng)性?。
外源性干擾?：溶血樣本中的血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶活性，可能引發(fā)非特異性顯色;細(xì)菌污染或樣本反復(fù)凍融也會(huì)影響結(jié)果準(zhǔn)確性?。
抗凝劑影響?：EDTA、肝素等可能干擾酶反應(yīng)或抗原抗體結(jié)合?。
二、操作與試劑因素
加樣誤差?：移液器未校準(zhǔn)、吸頭松動(dòng)或加樣速度不均導(dǎo)致孔間差異?。
孵育條件?：溫度不均(如邊緣效應(yīng))、時(shí)間控制不當(dāng)影響反應(yīng)一致性?。
洗滌問(wèn)題?：沖洗不凈(殘留未結(jié)合物質(zhì))或過(guò)度沖洗(洗脫結(jié)合復(fù)合物)?。
試劑質(zhì)量?：抗體純度低、顯色液變質(zhì)或稀釋不均直接影響信號(hào)穩(wěn)定性?。
三、設(shè)備與環(huán)境因素
酶標(biāo)板問(wèn)題?：孔底劃痕或邊緣效應(yīng)導(dǎo)致吸光度偏差?。
儀器校準(zhǔn)?：酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置錯(cuò)誤或波長(zhǎng)選擇不當(dāng)影響讀數(shù)?。
交叉污染?：重復(fù)使用封板膜或吸頭導(dǎo)致孔間污染?。
四、系統(tǒng)誤差與人為因素
方法局限性?：鉤狀效應(yīng)(高濃度抗原假陰性)或抗體交叉反應(yīng)?。
操作差異?：不同工作人員的手法(拍干力度、孵育時(shí)間控制)引入批間變異?。
優(yōu)化建議
標(biāo)準(zhǔn)化操作?：使用多通道移液器、嚴(yán)格控溫(37℃±1℃)、增加洗滌次數(shù)?。
質(zhì)量控制?：設(shè)立空白對(duì)照、定期校準(zhǔn)儀器、避免溶血樣本?。
通過(guò)針對(duì)性控制上述因素，可顯著提升ELISA結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性?。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒
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