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?人抗DNA酶B抗體(anti-DNaseB)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明主要包括實(shí)驗(yàn)原理、樣本處理、試劑準(zhǔn)備及實(shí)驗(yàn)步驟等?。
實(shí)驗(yàn)原理：
人抗DNA酶B抗體(anti-DNaseB)ELISA試劑盒采用ELISA(酶聯(lián)免疫)方法，用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中人抗DNA酶B抗體的含量。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，通過(guò)間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，將樣本加入預(yù)先包被人抗DNA酶B抗體捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌后，用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人抗DNA酶B抗體呈正相關(guān)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度?12。
樣本處理：
血清樣本需將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可。血漿樣本則需用EDTA或肝素作為抗凝劑采集。樣本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)，保存過(guò)久可發(fā)生聚合，在ELISA中可使本底加深。凍結(jié)標(biāo)本溶解后，應(yīng)充分混勻，避免氣泡。
試劑準(zhǔn)備：
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。標(biāo)準(zhǔn)品需用樣本稀釋液復(fù)溶，并靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)助其溶解。洗滌緩沖液需按一定比例稀釋。檢測(cè)稀釋液A和B以及檢測(cè)溶液A也需按說(shuō)明書(shū)要求準(zhǔn)備?。
實(shí)驗(yàn)步驟：
將試劑盒及樣本置于室溫平衡。
按照說(shuō)明書(shū)要求設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白對(duì)照孔。
向各孔中加入相應(yīng)量的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本或稀釋液。
加入檢測(cè)試劑，經(jīng)過(guò)溫育和洗滌。
加入底物顯色，并在規(guī)定時(shí)間內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品孔的吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本濃度。
請(qǐng)注意，人抗DNA酶B抗體(anti-DNaseB)ELISA試劑盒主要用于科研方面，不用于臨床診斷，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵守說(shuō)明書(shū)要求，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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